从1990年体外合成的mRNA第一次在细胞内表达，到2020年的mRNA疫苗在对抗新冠病毒中发挥重要作用，以mRNA为基础的预防免疫方式已经在疫苗领域引起了一场重大革命。此外，随着技术的不断革新，RNA作为药物，在治疗领域也逐渐拨开云雾见月明。mRNA巨头的管线布局及合作逐渐多样化，BioNTech在2023年以来，相继与昂科免疫、映恩生物、道尔生物、宜联生物、药明生物和普米斯达成BD交易，交易管线中以ADC产品居多。Moderna除了传染病疫苗的强势布局外，肿瘤及罕见病治疗管线进展同样迅速。

　　时代将RNA预防与治疗技术推到了大众的眼前，然而，RNA技术远不止于此。

　　基于mRNA方式的CRISPR/Cas9基因编辑

　　相比于传统质粒和病毒载体方法，mRNA可瞬时表达所需的蛋白质，通过mRNA方式进行基因编辑可避免核酸酶的持续表达、或基因整合的风险。CRISPR/Cas9作为目前最常使用的基因编辑系统之一，在sgRNA引导下，可将mRNA瞬时表达的Cas9蛋白定位到靶位点后进行DNA切割。

　　近岸蛋白提供高效Cas9 mRNA（目录号：MR107/MR019）目录产品和sgRNA体外合成试剂盒（目录号：E369），以及编辑效率验证用酶T7E1（目录号：M017），基因编辑全套产品，为您的实验保驾护航。

　　RNA干扰技术

　　RNA干扰（RNA interference，缩写为RNAi）是指由双链RNA诱发的基因沉默现象，其机制是当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默，从而用于调控基因表达。RNAi是分子生物学领域最为重要的一项技术突破，它让我们能够更为直观的看到特定基因的功能缺失效应，并且能够针对基因组内可能贡献疾病表型的潜在基因，开展鉴定和功能分析。

　　RNAi中最为重要的一环为siRNA的制备，常用的合成方法有化学合成、体外转录以及通过RNase III消化长链dsRNA制备siRNA。化学合成的siRNA一大特点是纯度够高，但是合成成本较高，不适用于前期siRNA的筛选工作。体外转录得到的siRNA具有毒性小，稳定性好，效率高等特点，非常适合前期筛选siRNA，特别是需要制备多种siRNA时，成本低，单次转录即可获得足够量的siRNA。通过RNase III消化长链dsRNA制备siRNA通常是制备200-1000个碱基的靶mRNA模板，体外转录制备长链dsRNA，再用RNase III将长链dsRNA消化成数个siRNA的混合物。这个siRNA混合物可以直接转染细胞。由于siRNA混合物中含有许多不同的siRNAs，从而保证目的基因能够被有效抑制。dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省了时间和金钱成本。

　　近岸蛋白提供兼容长链和短链RNA转录试剂盒（目录号：E332/E131），20μl转录体系可得到100-200μg左右的RNA用于siRNA制备。

　　RNA/蛋白质互作研究

　　RNA结合蛋白参与RNA合成、剪接、翻译等多个转录后调控过程。同时，RNA也会参与调节RNA结合蛋白的活性或与其他蛋白质相互作用，两者相互作用下，影响了RNA/蛋白质介导的相关细胞事件。研究这些相互作用可以帮助我们了解疾病的机制，并寻找新的治疗靶点。

　　目前研究RNA/蛋白质互作的方法大致分为两个途径：

　　01 已知RNA，寻找与之相互作用的蛋白质，例如RNA pull-down RNA pull-down方法中，首先利用体外转录得到标记有生物素的RNA探针，然后将RNA探针与蛋白提取液共同孵育，形成RNA-蛋白质复合物，再利用链霉亲和素磁珠纯化得到复合物，洗脱后通过Western Blot等方法检测相互作用。

　　针对体外转录部分，近岸蛋白提供兼容长链和短链RNA转录试剂盒（目录号：E332/E131），20μl转录体系可得到100~200μg左右的RNA用于RNA探针制备。针对Western Blot部分，近岸蛋白提供即用型蛋白marker（目录号：PM001，14～120kDa）及彩虹预染型蛋白marker（目录号：PM008，10～180kDa）。

　　02 已知蛋白质，寻找与之相互作用的RNA，例如RIP、CLIP RIP 技术基于免疫沉淀技术，利用目标蛋白抗体，把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化，获得结合在复合物上的RNA，最后通过高通量测序方法获得RNA序列信息。

　　与RIP类似，CLIP技术的原理是基于RNA与RNA结合蛋白会在紫外照射下会发生共价结合，然后再用RNA结合蛋白的特异性抗体将RNA-蛋白复合物沉淀之后，回收RNA片段，最后进行高通量测序分析序列信息。

　　针对高通量测序，近岸蛋白提供cDNA第一链/第二链合成试剂盒（目录号：E047/N422），基于转座酶打断系统NGS建库试剂盒（目录号：N231/N234）及传统打断酶法连接建库试剂盒（目录号：N256）。

　　RNA水平的研究还有多种技术，例如cDNA文库构建、转录组分析等等，作为中心法则的中间环节，RNA对基因及蛋白质的调控起着关键作用。对RNA的研究有助于发现关联疾病的发病机制，帮助设计更有效的药物。

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