嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法是肿瘤治疗领域的重大突破。然而，传统体外（ex vivo）CAR-T疗法因制备流程复杂、成本高昂和治疗周期长等问题限制了其临床应用。体内（in vivo）CAR-T疗法通过直接体内改造T细胞，有望实现“现货型”治疗，提高可及性并降低成本，成为新一代细胞治疗的重要方向。

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　　体内CAR-T技术平台与发展现状

　　目前，体内CAR-T研发主要依托慢病毒载体和LNP-mRNA两大技术平台，各有其特点与适用范围。与传统体外CAR-T疗法相比，体内CAR-T技术无需复杂的细胞采集、体外改造和回输流程，有望大幅降低治疗成本并提高可及性。这两大平台在递送机制、表达特性和临床应用方面展现出不同的技术优势，为肿瘤和自身免疫性疾病的治疗提供了创新解决方案。

　　慢病毒载体平台

　　慢病毒载体可实现CAR基因的稳定整合与长效表达，这种持续性表达特性对于需要长期免疫监控的恶性肿瘤治疗具有重要意义。代表性产品ESO-T01针对复发/难治性多发性骨髓瘤开展了初步临床研究，该研究纳入了多个治疗中心的患者群体。临床数据显示，结果显示所有患者均出现治疗反应，客观缓解率达到了令人鼓舞的水平，且未发生严重细胞因子释放综合征（CRS），初步验证了该平台的安全性及有效性。值得注意的是，该平台通过工程化包膜蛋白实现T细胞靶向，利用特异性配体-受体相互作用确保载体精准递送至目标细胞，无需体外细胞操作，显著简化了治疗流程，使得治疗可以在更多医疗机构开展，而不局限于具备细胞处理能力的专业中心。

　　LNP-mRNA平台

　　该平台利用靶向性脂质纳米颗粒包裹编码CAR的mRNA，通过细胞内吞作用进入T细胞后释放mRNA，实现体内瞬时表达，避免基因组整合风险。这种瞬时表达的特性为治疗提供了更好的安全性控制窗口，特别适用于需要精确控制免疫反应强度和持续时间的临床场景。其主要挑战在于靶向递送效率和表达的持久性，多个研究团队正在通过优化LNP配方、改进靶向配体设计以及开发新型mRNA修饰策略来解决这些问题。目前已有产品进入临床阶段，计划用于治疗B细胞介导的自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等，这一应用方向的探索拓展了CAR-T技术的应用范围，使其从肿瘤治疗领域延伸至更广泛的免疫系统疾病治疗。

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　　监管路径与临床转化策略

　　体内CAR-T产品的开发需遵循严格的非临床和临床研究规范，这些规范涵盖了从早期研发到上市后监测的全生命周期管理要求。与传统CAR-T疗法相比，体内CAR-T的监管审评需要额外考虑载体的安全性、靶向特异性以及体内直接转导的风险因素。其中CMC（化学、生产和控制）和非临床安全性研究是IND申请的核心，监管机构通常要求申办方提供详尽的技术文档和风险评估报告，以确保产品的质量可控性和临床应用的安全性。

　　CMC要求

　　慢病毒载体平台：慢病毒载体需明确载体构建、生产流程、纯化工艺及质量控制策略。在载体构建方面，需要详细描述载体骨架设计、启动子选择、CAR序列优化以及安全性改造措施。生产流程必须符合GMP规范，采用多质粒系统进行瞬时转染，使用经过充分验证的细胞系。重点质控项目包括病毒滴度、复制能力病毒检测（RCL检测需达到检测限以下）和无菌保证等。此外，还需建立病毒载体的身份确认、纯度分析、内毒素控制、宿主细胞DNA残留等全面的放行标准体系。

　　LNP-mRNA平台：LNP-mRNA平台则需关注mRNA序列优化（包括5"UTR、3"UTR、polyA尾巴设计以及核苷酸修饰策略）、LNP组成（阳离子脂质、辅助脂质、胆固醇和PEG化脂质的配比优化）、包封率、靶向修饰（如抗CD3单链抗体或其他T细胞特异性配体的偶联效率和活性保持）及稳定性等关键质量属性。mRNA的完整性需通过毛细管电泳或芯片电泳进行评估。LNP的粒径分布应控制在80-120 nm范围内，保证体内分布的均一性。长期稳定性研究需在-80°C、-20°C和2-8°C条件下进行，为产品的储存和运输提供数据支持。

　　非临床研究

　　需开展系统的GLP毒理学试验。试验项目包括单次（基于病毒和LNP 平台递送）与重复给药毒性（LNP 平台递送）、生物分布（采用qPCR或免疫组化方法追踪载体在各组织器官中的分布和清除动力学）、免疫毒性（包括细胞因子谱分析、免疫细胞亚群变化和自身免疫反应评估）和致瘤性/整合位点分析。动物模型常采用免疫缺陷小鼠（如NSG小鼠）建立人源化模型和非人灵长类（通常选择食蟹猴），以评估安全性和药效。小鼠模型主要用于概念验证和初步安全性评估，而非人灵长类试验则提供更接近人体的安全性数据，并为临床起始剂量提供依据。剂量设计应包括预期临床剂量的10倍安全系数，并设置适当的恢复期观察。

　　临床开发与试验设计

　　I期临床试验通常采用传统3+3剂量递增设计，起始队列通常纳入3-6名患者，重点评估安全性、耐受性和最大耐受剂量（MTD）或推荐II期剂量（RP2D）。剂量递增决策需要数据安全监察委员会（DSMB）的独立评估，并设置明确的剂量限制性毒性（DLT）定义和停止规则。需建立完善的风险控制策略，配备经过培训的CAR-T管理团队，对CRS（采用ASTCT分级标准）、神经毒性（ICANS评分系统）等不良事件进行专项监测与管理，并制定详细的毒性管理算法和托珠单抗、皮质激素等支持治疗方案。

　　临床方案中需明确药效学生物标志物（如CAR-T细胞扩增动力学、细胞因子释放谱、肿瘤负荷变化）、药代动力学评估方法（采用流式细胞术或qPCR监测CAR拷贝数）和长期随访计划（至少15年，用于监测迟发性不良事件、二次恶性肿瘤和病毒重激活等）。此外，还应建立生物样本库，收集外周血、骨髓和肿瘤组织样本，用于转化研究和耐药机制探索，为后续产品优化提供科学依据。

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　　技术挑战与发展前景

　　尽管体内CAR-T显示巨大潜力，在简化治疗流程、降低成本和提高可及性方面展现出革命性优势，仍面临多方面挑战需要产学研各界共同攻克。靶向递送效率是首要技术难题，目前载体的T细胞特异性仍有待提高，脱靶效应可能导致其他免疫细胞的非预期转导，影响治疗的精准性和安全性。免疫原性控制方面，重复给药可能诱发抗载体免疫反应，特别是针对病毒载体包膜蛋白或LNP成分的中和抗体产生，可能降低后续治疗效果，这需要开发新型免疫逃逸策略或个体化给药方案。长期安全性评估需要建立完善的随访体系，特别关注插入突变、克隆性扩增和继发性恶性肿瘤的风险，这些潜在风险需要通过大规模、长期的真实世界研究来充分评估。生产工艺标准化是实现商业化的关键瓶颈，需要建立稳健的放大工艺、严格的质量控制体系以及完整的供应链管理，确保批次间一致性和产品的稳定供应。此外，全球监管机构对这类创新产品的评价体系仍在发展中，不同国家和地区的监管要求存在差异，需企业积极沟通并积累数据，推动国际监管协调和指导原则的制定。

　　未来发展方向

　　未来，随着载体工程（如开发第四代慢病毒载体、自失活型载体和非整合型载体系统）、靶向策略（包括双特异性靶向、条件性激活和微环境响应型设计）和生产工艺（连续制造、密闭系统和自动化平台）的持续优化，体内CAR-T有望在更多适应症中实现应用。在实体瘤领域，通过克服肿瘤微环境的免疫抑制、增强CAR-T细胞浸润和改善持续性，有望突破当前CAR-T在实体瘤治疗中的局限。自身免疫性疾病方面，包括系统性红斑狼疮、多发性硬化症、1型糖尿病等，通过精准清除致病性B细胞或调节性T细胞重编程，可能实现疾病的长期缓解甚至治愈。

　　同时，国际多中心临床开发和注册策略将加速其全球化进程。通过建立国际临床试验网络、采用统一的疗效评价标准和安全性监测体系，可以加快数据积累和监管审批。新兴市场的参与将扩大患者池，提供更多样化的临床数据。此外，与监管机构的早期科学建议会议、突破性疗法认定和加速审批通道的利用，将显著缩短开发时间。真实世界证据的收集和利用也将在上市后的适应症扩展和优化治疗方案中发挥重要作用。

　　结论

　　体内CAR-T疗法代表细胞治疗领域的重要演进方向，标志着从个体化定制治疗向标准化、规模化治疗模式的转变。这一技术革新不仅有望解决传统CAR-T疗法的成本和可及性问题，还可能开启细胞治疗的新纪元。早期临床数据展示了其可行性，多个I/II期临床试验的阳性结果为该领域注入了信心，但进一步验证其安全性、有效性及规模化生产能力仍需持续努力。关键的验证包括在更大规模患者群体中的疗效确认、不同适应症的拓展研究、以及头对头比较试验以明确相对于传统CAR-T的优势。

　　产业化进程需要多方协同推进，包括学术机构的基础研究创新、制药企业的工艺开发和临床转化、监管机构的科学指导和政策支持、以及资本市场的持续投入。通过技术创新与密切的监管协作，建立行业标准和最佳实践指南，体内CAR-T有望为更多患者提供可及、高效的治疗选择，最终实现"现货型"细胞治疗产品的愿景，让CAR-T疗法真正惠及全球患者，成为癌症和其他重大疾病治疗的标准选择之一。这将不仅改变现有的治疗格局，更将推动整个细胞治疗产业向着更加成熟、规范和可持续的方向发展。

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　　益诺思CAR-T项目经验

　　益诺思具备领先的CGT全流程研发实力，汇聚全球专家团队，以扎实项目经验与获批成果，为创新药开发提供坚实保障。

　　扎实的CAR-T项目经验与全流程服务能力

　　益诺思已完成48项CAR-T药物开发项目，覆盖从早期筛选、IIT研究，到IND与NDA申报的全流程，并承接多项非申报类研究，包括药效学与药代动力学评价，具备完整的临床前研发服务能力。

　　具备国际视野的复合型专家团队

　　益诺思的资深专家团队包括前FDA（CBER/CDER）审评专家、NMPA CDE资深审评专家、CNAS GLP检查员、DABT/DCST注册毒理学家，以及来自日本毒性病理学会的现场专家，形成覆盖国际申报的复合型技术支持体系。

　　以成果为导向的创新支持记录

　　截至2025年6月30日，益诺思已经支持200余项全球或中国首创药物的开发，累计完成2项中美双报，并成功推动1项CAR-T产品获得NMPA的NDA批准，持续为客户提供科学可信、结果可交付的研发支持。